1.怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養條件？

ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了絕大多數細胞(bao)的(de)詳細資(zi)料(liao)(liao)。打開(kai)ATCC網頁(ye)的(de)Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸入細胞(bao)名稱(cheng)就(jiu)可以(yi)搜索ATCC的(de)細胞(bao)數據庫。數據庫中(zhong)有每(mei)一種細胞(bao)的(de)詳細描述(shu)，包括細胞(bao)的(de)來源(yuan)，培養和凍存條件，以(yi)及相(xiang)關文獻等資(zi)料(liao)(liao)。

2.如何選用特殊細胞系培養基？

培養(yang)某類型細胞沒有固定(ding)的(de)培養(yang)條(tiao)件。MEM中培養(yang)的(de)細胞，很可(ke)能在DMEM或M199中同(tong)樣(yang)容(rong)易生(sheng)長。總之，MEM、DMEM做(zuo)貼壁細胞培養(yang)；RPMI1640做(zuo)懸浮細胞培養(yang)；

新的細(xi)胞(bao)培養時要詳查資料。

3.自己新配制的液體培養基能保存多久？

我(wo)們(men)建議(yi)將新配制的培(pei)養基放置(zhi)于4℃，避光保存盡量在一周內(nei)使(shi)用完畢(bi)，培(pei)養基越新鮮越好。

4.培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦(dan)您(nin)在新鮮培養基中添加了血清和抗生(sheng)素時，您(nin)應該在一到兩周內(nei)使用它。因為(wei)一些抗生(sheng)素和血清中的基本成分在解凍后就開(kai)始降解。

5.培養基中是否須添加抗生素？

除了特殊篩選系統外，一般(ban)正常培養狀(zhuang)態下，培養基(ji)中不應(ying)添加(jia)任何抗(kang)生素(su)。

為(wei)防止細菌(jun)、真菌(jun)污染(ran)，可以(yi)加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液(ye)，其(qi)培養基中的終濃度為(wei)青霉素100U/ml，鏈霉素為(wei)100ug/ml，但是(shi)不建議長期使用。

6.液體培養基可以放-20℃保存嗎？

不可(ke)(ke)以！因為在-20℃下，培(pei)養(yang)基(ji)(ji)中(zhong)的鹽容易析出，培(pei)養(yang)基(ji)(ji)融化后，有(you)的鹽可(ke)(ke)能(neng)無法重新(xin)溶解，從而(er)導致(zhi)培(pei)養(yang)基(ji)(ji)滲透壓降低，培(pei)養(yang)細胞時，細胞容易破裂而(er)死亡。

7.為何培養基保存于4℃冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值越來越偏堿性？

培養(yang)(yang)基(ji)保存于4℃冰箱(xiang)中， 培養(yang)(yang)基(ji)內之(zhi)CO2 會逐漸溢出(chu)，造成(cheng)培養(yang)(yang)基(ji)越(yue)來越(yue)偏(pian)堿性。而(er)培養(yang)(yang)基(ji)中的酸堿指(zhi)示劑(通常為phenol red) 的顏(yan)色(se)也(ye)會隨堿性增加而(er)更偏(pian)暗紅。培養(yang)(yang)基(ji)偏(pian)堿之(zhi)結果(guo)， 將造成(cheng)細胞生長停滯(zhi)或(huo)死亡。若培養(yang)(yang)基(ji)偏(pian)堿時， 可(ke)以通入(ru)無(wu)菌(jun)過濾的CO2， 以調整pH 值。

8.為什么液體培養基1640顏色發黃，是pH值不對嗎？

不是。因為配方原因，1640為減(jian)酚紅(hong)(hong)型，其中(zhong)酚紅(hong)(hong)的濃(nong)度只有DMEM的四分之一，所以(yi)是因為酚紅(hong)(hong)濃(nong)度低，而非PH值低。

9.培養液pH是怎樣影響細胞生長的？

由于大多數細胞(bao)適宜(yi)PH值(zhi)為(wei)7.2-7.4，偏離(li)此范圍對細胞(bao)將(jiang)產生有害的(de)影響。各種(zhong)細胞(bao)對PH值(zhi)要求也(ye)不q相同，原(yuan)代細胞(bao)培養(yang)一(yi)般(ban)對PH值(zhi)變動耐(nai)受差(cha)，無限細胞(bao)系耐(nai)受力強(qiang)。

但(dan)總體來(lai)說，細胞(bao)耐酸(suan)性比耐堿性強一些，偏酸(suan)環境(jing)中(zhong)更(geng)有利于細胞(bao)的生長。因此(ci)，配制培養(yang)用(yong)液時可(ke)把液體的PH值稍微(wei)調的偏酸(suan)一些。液體在經過(guo)0.1um或(huo)0.2um濾膜過(guo)濾時，PH值會向上浮動0.2左右。

10.培養液滲透壓是怎樣影響細胞生長的？

當細胞(bao)內、外環境的(de)分子濃度不同時(shi)就會產生(sheng)滲透(tou)(tou)壓。這種(zhong)情(qing)況下，水(shui)分通過滲透(tou)(tou)流(liu)入或流(liu)出細胞(bao)，從而改變細胞(bao)的(de)內環境。

高滲(shen)透(tou)壓迫使(shi)(shi)水分從細(xi)(xi)胞(bao)(bao)中擴散出來導致(zhi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)收縮，這種情況(kuang)會使(shi)(shi)DNA和蛋白遭到破壞(huai)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)周(zhou)期停滯(zhi)以及最終使(shi)(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)死亡；反之，低滲(shen)透(tou)壓使(shi)(shi)水分流入細(xi)(xi)胞(bao)(bao)內(nei)，使(shi)(shi)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)腫脹破裂。

11.為什么有客戶要求培養基中不含酚紅？

研究表(biao)明，酚(fen)紅(hong)可(ke)以模擬固醇類(lei)激素(su)的(de)作用（特別是(shi)雌激素(su)）。為避(bi)免固醇類(lei)反應，細(xi)胞培養(yang)，尤其是(shi)哺乳(ru)類(lei)細(xi)胞時，用不加酚(fen)紅(hong)的(de)培養(yang)基。由(you)于(yu)酚(fen)紅(hong)干擾檢測，一些研究人員在(zai)做流式細(xi)胞檢測時，不使用加酚(fen)紅(hong)的(de)培養(yang)基。

12.酚紅的作用是什么？

酚紅在培養基(ji)中(zhong)被(bei)用來作(zuo)為(wei)PH值指示劑：中(zhong)性(xing)(xing)(xing)時(shi)為(wei)紅色，酸性(xing)(xing)(xing)時(shi)為(wei)黃色，堿性(xing)(xing)(xing)時(shi)為(wei)紫色。

13.干粉培養基里含NaHCO3嗎？

所有(you)的干粉(fen)培養(yang)基中都不含NaHCO3 。

請依據說明(ming)書或包裝(zhuang)袋上的標注，在干粉培養基溶解后添(tian)加NaHCO3 。

14.NaHCO3的作用是什么？

與CO2一起形成(cheng)緩(huan)沖系統(tong)，保(bao)持培養基PH值穩定。

15.我們實驗室培養箱CO2濃度一直以來都是5%，這樣可以嗎？

當然不(bu)(bu)可以，不(bu)(bu)同的培養基(ji)(ji)要求(qiu)添加NaHCO3的量不(bu)(bu)一樣，如DMEM要求(qiu)添加3.7g/L，為了保(bao)持PH值穩定，必須用高濃度(du)的CO2平衡，一般不(bu)(bu)低于8%，而(er)1640等要求(qiu)添加NaHCO3 2.2g/L，還有(you)些(xie)培養基(ji)(ji)要求(qiu)添加更(geng)少，那么這(zhe)些(xie)培養基(ji)(ji)就要求(qiu)較低的濃度(du)平衡，一般是(shi)5%。

16.培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？

丙(bing)酮(tong)酸(suan)鈉可(ke)以(yi)(yi)(yi)作(zuo)為細胞(bao)培養中(zhong)的替代(dai)碳(tan)源(yuan)，盡管細胞(bao)更(geng)傾向于以(yi)(yi)(yi)葡(pu)萄糖作(zuo)為碳(tan)源(yuan)，但是如果沒有葡(pu)萄糖的話，細胞(bao)也可(ke)以(yi)(yi)(yi)代(dai)謝丙(bing)酮(tong)酸(suan)鈉。

丙酮(tong)酸鈉的貯存液濃度(du)一般為50mM，-20℃保存，培養基中的終濃度(du)為1mM.

17.谷氨酰胺的作用是什么？

幾乎所有的細(xi)(xi)(xi)胞(bao)對谷氨酰(xian)胺都(dou)(dou)有較高(gao)的要(yao)求。谷氨酰(xian)胺脫掉氨基后(hou)，可(ke)作為培養細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的能量來(lai)源，參(can)與(yu)蛋白(bai)質的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰(xian)胺時(shi)，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)生長不良而死(si)亡(wang)。所以，各(ge)種培養液中都(dou)(dou)含有較大量的谷氨酰(xian)胺。

谷氨(an)酰胺在溶液(ye)中很不穩(wen)定，應(ying)置-20℃冰凍保存(cun)，用前加入(ru)(ru)培養基中。加有谷氨(an)酰胺的液(ye)體培養基4度冰箱儲(chu)存(cun)兩(liang)周以上時，應(ying)重新加入(ru)(ru)原來量(liang)的谷氨(an)酰胺。

18.在培養基中加入HEPES有何好處？

培養(yang)基中的Buffer system是碳酸氫鹽，它(ta)可(ke)提供營養(yang)，但卻(que)在生理PH值(zhi)條件下會(hui)降(jiang)低緩(huan)沖(chong)能力(li)。而HEPES是一種很強(qiang)的Buffer，加入HEPES能使細胞培養(yang)基在PH7.2-7.6條件下緩(huan)沖(chong)能力(li)增(zeng)強(qiang)。

Hepes的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培(pei)養基中(zhong)的終(zhong)濃度為25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml培(pei)養基中(zhong)。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么？培養細胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ？這個二肽有多穩定？

GlutaMAX-Ⅰ是一個L-谷(gu)氨酰(xian)胺(an)(an)的(de)衍生物，其(qi)不穩定(ding)的(de)a-氨基用(yong)L-丙(bing)氨酸來保護。一種肽(tai)酶(mei)逐漸裂解二(er)肽(tai)，釋放L-谷(gu)氨酰(xian)胺(an)(an)供利用(yong)。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩定，即使在(zai)121℃滅(mie)菌(jun)20min， GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液(ye)有最(zui)小的降解；而在(zai)相同(tong)條件(jian)下，L-谷氨酰胺降解。

L-谷氨(an)(an)酰(xian)胺在細胞培養(yang)時是(shi)重要的(de)，但其在溶液(ye)中不穩定，經過(guo)一段(duan)時間后會降(jiang)解，確切的(de)降(jiang)解率(lv)一直沒有最終確定。L-谷氨(an)(an)酰(xian)胺的(de)降(jiang)解導致氨(an)(an)的(de)形成，而氨(an)(an)對于一些細胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是(shi)細胞培養(yang)中谷氨(an)(an)酰(xian)胺的(de)替代品。

20.可否使用與原先培養條件不同的培養基？

不能。每(mei)一(yi)細胞(bao)株均有其特定使用(yong)且已適應之(zhi)細胞(bao)培(pei)養(yang)基(ji)，若(ruo)驟然(ran)使用(yong)和原先提(ti)供之(zhi)培(pei)養(yang)條件不同(tong)的培(pei)養(yang)基(ji)，細胞(bao)大多無法立即適應，造成(cheng)細胞(bao)無法存活。